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荧光 RNA 常见问题解答

常见问题

  1. 问：如何开始将 Pepper 技术应用到我的研究中？

答：Pepper 试剂由 HBC 染料和编码 Pepper RNA 的质粒组成。客户应在首次订购时将阳性对照质粒（大肠杆菌的 PET2808MCS0 或哺乳动物细胞的PAPU608MCS0 ）与所选的 HBC 染料一起包含；或者，客户可以订购Pepper 荧光 RNA 入门套件（Cat# PET2808KIT 或PAPU608KIT）。RNA的拷贝数通常比蛋白质少 3-4 个数量级，因此在活细胞中对 RNA 进行成像仍然具有挑战性。尽管与其他活细胞标记技术相比，Pepper 的亮度和信噪比大大提高，但使用 Pepper 标记的实验应谨慎进行并进行良好控制。对于初学者，我们强烈建议您先使用表达 Pepper 或 Pepper 串联阵列的载体作为阳性对照，然后再测试您自己的编码目标 RNA 的构建体。在 293T 细胞、Cos7 细胞或 Hela 细胞中测试这些 Pepper 或 Pepper 串联阵列的转染、染色和成像，作为阳性对照。然后在您自己的细胞中测试这些阳性对照。您可以优化细胞培养、转染、染色或成像的条件或参数，以获得最佳信号/背景比。然后，您可以继续使用 Pepper 标记的目标 RNA。

  1. 问：哪些仪器与 Pepper 技术兼容

答：辣椒荧光RNA可以通过许多能够检测荧光信号的常规仪器检测，例如显微镜、流式细胞仪、酶标仪或定量PCR仪。

  1. 问：我可以用肉眼观察表达 Pepper 荧光 RNA 的活细胞吗？

答：是的，您可以使用荧光显微镜用肉眼轻松观察表达 Pepper 荧光 RNA 的细胞。

  1. 问：哪种 HBC 配体最好？

答：有 8 种不同颜色的 HBC 配体。您可以根据细胞的性质、应用和仪器的设置来选择适合自己应用的 HBC 配体。请记住，颜色、亮度、光稳定性和信号/背景比是获得良好结果的重要因素。我们建议您从 HBC 配体试剂盒（总共 8 种颜色）开始，并在您的细胞和仪器上测试每种 HBC 配体的性能。每种仪器都有不同的激发光源和激发/发射滤光片，因此您可以测试并选择与您的仪器最兼容的 HBC 染料。不同的 HBC 配体在某些细胞中可能具有不同的背景信号，必须对此进行测试。一般而言，所有配体在大肠杆菌细胞中都效果良好，而 HBC485\ HBC497\ ​​HBC514\ HBC530\ HBC620 配体在人类细胞中具有足够的亮度和低背景。其中，HBC497和HBC530复合的Pepper具有最佳信底比，推荐用于低拷贝数RNA的检测，但在强激发光下可逆光切换，因此不适合快速共聚焦成像（快速双光子成像或1帧/分钟的慢速共聚焦成像都可以）或SIM成像。HBC485和HBC620复合的Pepper具有较高的光稳定性，推荐用于快速共聚焦成像和SIM成像。

  1. 问：我应该选择哪种尺寸的HBC产品？

A：请参考下表确定HBC染料的规格，请注意，同一规格的产品，每种HBC染料的含量可能不同，但原液体积和样品数量是相同的。

HBC 的大小

原液 (ul)

工作溶液（毫升）

样品数量（96孔板）

样本数字

（35 毫米天线）

电视

三十

三十

600

60

年代

60

60

1200

120

大号

200

200

4000

400

* 不同样品格式的工作溶液最小体积：盖玻片上的染色样品为 5 ul；96 孔微孔板每孔 50 ul；35 mm 成像盘每孔 0.5 ml。为获得最佳效果，也可以使用更大体积的工作溶液。

  1. 问：HBC配体的储存和运输条件是什么？

HBC 染料在常温下可稳定保存数月，因此在常温下运输不会对其质量、完整性和功能性能产生明显影响。对于长期储存，HBC 染料可在 -20°C 下储存，并保持活性至少 18 个月。根据小瓶上的标签（T 尺寸 30 ul，S 尺寸 60 ul，L 尺寸 200 ul）用无水 DMSO 重构 HBC 染料，以制备 1000X 原液。将溶液储存在 -20°C 下，并避光。可将原液分装成等份储存，以避免多次冻融循环。原液可保持活性至少三个月。

  1. 问：你们在活体动物身上测试过 Pepper RNA 吗？

答：不是。

  1. 问：我可以通过银行电汇付款吗？

答：是的。请通过电子邮件联系我们，说明要订购哪些产品。我们将向您发送银行电汇发票。

  1. 问：我可以用信用卡支付吗？

答：可以。中国境外的客户可以使用 Visa 或 Master 信用卡通过 Paypal 结账。

  1. 问：我可以通过 Paypal 付款吗？

答：可以。中国境外的客户可以使用 Paypal 快速结账付款。

  1. 问：购买后运费怎么办？

答：我们通过联邦快递或国际快递发货。付款确认后，我们将安排发货并通过电子邮件向您发送跟踪号。

  1. 问：对于中国以外的客户，你们的报价是否含税？

答：对于中国以外的客户，报价不含任何税费。客户应自行承担您所在国家/地区可能产生的任何税费或关税。